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リン−化学分析法−

最終更新日：2016年6月24日

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• 分析法の『リンク』はこちらを参照。
• 連続抽出法の『リンク』はこちらを参照。

【リン分析法全般】

• JIS（HP/2011）による『JISK0102　 工場排水試験方法』
  　日本工業標準調査会（JISC）による『JIS検索』から。
  

  46.　りん化合物及び全りん 　　　　46.1　りん酸イオン（PO43-）　…モリブデン青吸光光度法 　　　　46.2　加水分解性りん 　　　　46.3　全りん　…ペルオキソニ硫酸カリウム（K2S2O8）分解法または硝酸-過塩素酸分解法

• 農林水産省（HP/2009）による『土壌の可給態リン酸評価法』【見る→】
• Kovar & Pierzynski（編）(2009)による『Methods of Phosphorus Analysis for Soils, Sediments, Residuals, and Waters Second Edition（土壌と堆積物と残留物と水のリン分析法　第2版）』【見る→】を参照（分析法全般のまとめ）。
• Lukkari（2008）による『Chemical characteristics and behaviour of sediment phosphorus in the northeastern Baltic Sea（バルト海北東部の堆積物リンの化学特性と挙動）』【見る→】を参照（過去の連続抽出法などのレビュー）。

※リンの化学分析法は、分野によって対象とする形態（化学種）が異なるとともに、目的に応じて多種多様の手法が用いられている。実際の化学種の決定は困難な場合も多く、現実的には、何らかの化学的操作によって区別できる分を分析する方法が用いられている。具体的には、リンの形態から：全P、全溶存P、溶存無機P、溶存有機P、粒子状無機P、粒子状有機P；あるいは、不安定なP、可溶性のP、交換性のP、ゆるく結合したP、Feと結合したP、Alと結合したP、Caと結合したP、など。また、リンの起源から：生物起源のP、自生のP、砕屑性のP、など。さらに、生物による利用性から：生物が利用可能なP（可給態＝available）、プランクトンが利用可能なP、農作物が利用可能なP、など。とくに固体の場合で、化学種を特定できた場合は鉱物名（アパタイトなど）や無機化合物名や有機化合物名（生物起源が主）も用いられている。
　固体試料の場合には、特定の操作によって溶液に変え、そのP画分について上記のような特有の名称を与えることが多い。また、液体試料であっても、固体（浮遊物質、懸濁物質）と液体（溶存物質）の区別は現実的には困難な場合が多いため、濾過操作におけるフィルターの孔径によって行われており、0.45ミクロンがよく使われている（こちらを参照）。分析手法（および分析機器）の違いによっても、結果が異なることが多い（ICPと比色の比較はこちらを参照）。
　歴史的には、農業における農作物の栄養の一つであるリン量の管理を目的とする土壌中のリンの化学分析が主要であり、多種類の土壌リン試験法が開発されてきている。この場合は、農作物である植物に利用できる形態がとくに重要である。
　近年は、さらに環境問題に関連して、とくに富栄養化との関連で、水試料（および堆積物試料）の分析例が多い。

※それぞれの内容についての概略は以下を参照。また、それぞれの論文の要旨は『論文リスト（物質循環）』のページの『リン』を参照。

土壌		堆積物		天然水
無機態	有機態	海水	淡水	無機態	有機態
◎Tiessen and Moir（1993） ◎Tiessen et al.（1984）⇒〔Hedley法〕 ◎★Hedley et al.（1982） ◎Tessier et al.（1979）	◎Reddy et al.（1998）《有機土壌》	Latimer et al.（2006）《オパールに伴う》 ◎Anderson and Delaney（2000）〔SEDEX法（4ステップ）〕 Schenau and De Lange（2000）《魚残骸》 ◎Golterman（1996）〔NTA/EDTA分別法〕《無機態》 ◎Jensen & Thamdrup（1993）〔←Psenner et al.（1988）〕《海洋堆積物・鉄結合リン》 ◎★Ruttenberg（1992）〔SEDEX法（5ステップ）〕 ◎De Lange（1992） ◎鎌谷・前田（1989）〔酸−アルカリ〕 ◎Lucotte & d'Anglejan（1985）《河口域・鉄結合リン》 ◎Williams et al.（1971）	◎Hupfter et al.(1995)《湖》 ◎★Psenner et al.(1984)、 Psenner et al.（1988）《湖（淡水）》 ◎★Hieltjes and Lijklema（1980）《湖》	Watanabe and Olsen（1962）《CDB抽出液：モリブデン青−塩化スズ（II）還元吸光光度法》 ★Murphy and Riley（1962）《NaOHおよびHCl抽出液：モリブデン青−アスコルビン酸還元吸光光度法》	Menzel and Corwin（1965）《海水−有機態》
土壌リン試験法 Bray 1：塩酸（HCｌ）とフッ化アンモニウム（NH4F）←Bray and Kurtz（1945） Mehlich 1：塩酸（HCｌ）と硫酸（H2SO4）←Mehlich Mehlich 3：酸〔酢酸（HOAc）と硝酸（HNO3）〕と塩〔フッ化アンモニウム（NH4F）と硝酸アンモニウム（NH4NO3）〕とキレート剤〔エチレンジアミン四酢酸（EDTA、C10H16N2O8、(HOOCCH2)2NCH2CH2N(CH2COOH)2）〕←Mehlich（1984） Olsen：炭酸水素ナトリウム（NaHCO3）（pH=8.5）←Olsen et al.（1954） IIP：鉄酸化物含浸紙（Fe-oxide impregnated paper）←Chardon（2000） AER：陰イオン交換樹脂（anion exchange resin）←Sharpley（2000）
◎：連続抽出法 ★：主要な分析法

【土壌リン試験法】

• Wang et al.（2013）による『Sequential extraction procedures for the determination of phosphorus forms in sediment』から　　
  

  Table 1. Extraction schemes for determining the fractional composition of sediment phosphorus. Procedure Extraction Proposed fraction Advantages Shortcomings SMT (Ruban et al., 2001) a. NaOH 1 M (extract+3.5 M HCl) b. 1 M HCl c. HCl 1 M d. HCl 1 M +calcination e. HCl 3.5 M +calcination NaOH-P HCl-P IP OP Conc. HCl-P Simple, practical partial resorption of P extracted by NaOH on CaCO3 Jensen (1998) a. MgCl2 1 M b. DB 0.11 M c. NaOH 0.1 M d. Acetate buffer 1M e. HCl 0.5 M f. ignition+HCl 1 M boilling loosely adsorbed IP and leachable OP iron-bound IP adsorbed IP and leachable OP authigenic apatite, CaCO3-bound IP and leachable OP detrital apatite refractory OP separating authigenic CFAP from detrital FAP very long; not practical; resorption by carbonates in calcareous sediments Golterman (1996) a. H2O b. Ca-EDTA 0.05 M + dithionite c. Na2-EDTA 0.1 M e. H2SO4 0.25 M f. NaOH 2 M labile P bioavailable iron-P bioavailable Ca-P non-available acid soluble organic P bioavailable reductant Organic P non-available giving more information on the　quantity of P available for algae not practical; EDTA interfere with P determination; complicated solution preparation; in some sediments, extraction must be repeated Penn (1995) a. NH4Cl 1 M (3×) b. NaOH 0.1 M (split) c. NaOH 0.1 M (split) d. HCl 0.5 M e. Persulfate digestion loosely bound-P loosely sorbed and CaCO3 associated-P Fe and Al bound-P extractable biogenic-P calcium mineral-P refractory organic-P dissolution of small amounts of Fe-P and Al-P by NH4Cl was avoided hydrolysis of organic P; no relation with bioavailability SEDEX (Ruttenberg, 1992) a. MgCl2 1 M b. CDB 0.3/1 M c. Acetate buffer 1 M e. HCl 1 M f. calcination+HCl 1M loosely sorbed P ferric Fe-bound P CFAP+ biogenic apatite+CaCO3-P detrital apatite organic P separating authigenic CFAP from detrital FAP very long; not practical; partial OP released by CD Williams (Burrus et al., 1990) a. NaOH 1 M b. HCl 1+3.5 M c. HCl 3.5 M+calcination d. HCl 1 M +calcination non-apatite P apatite P total P organic P Simple, practical partial resorption of P extracted by NaOH on CaCO3 Psenner (1988) a. NH4Cl 1 M b. DB 0.11 M 40 ℃ c. NaOH 1 M d. NaOH 1M e. HCl 0.5 M soluble P reductant-soluble P Fe- and Al-bound P refractory OP Ca-bound P identifying discrete P compounds resorption by carbonates in calcareous sediments; hydrolysis of organic P Hieltjes and Lijklema (1980) a. NH4Cl 1 M pH 7 b. NaOH 0.1 M c. HCl 0.5 M labile P Fe- and Al-bound P Ca-bound P Simple, practical dissolution of small amounts of Fe-P and Al-P by NH4Cl; hydrolysis of organic P; no relation with bioavailability Williams (1976) a. CDB 0.22/0.1 M b. NaOH 1 M c. HCl 0.5 M non-apatite P apatite P organic P Simple, practical resorption by carbonates in calcareous sediments Ca-P and org-P released by CDB Chang and Jackson (1957) a. NH4Cl 1 M b. NH4F 0.5 M pH 8.2 c. NaOH 0.1 M d. HCl 0.5 M e. CDB f. NaOH labile P Al-bound P Fe-bound P Ca-bound P reductant-soluble P refractory P identifying discrete P compounds extraction of Fe-P by NH4F resorption by CaF2 precipitation of phosphate with iron Wang et al.（2013）による『Sequential extraction procedures for the determination of phosphorus forms in sediment』から

• Elrashidi(HP、2010)による『Selection of an appropriate phosphorus test for soils』から【見る→】
  

  適切なリン試験と推奨法の選択に影響を与える土壌の性質

  土壌	pH	鉱物	方法
  酸性（acidic）	＜6.0	Al-P、Fe-P、Mn-P	Bray 1、Mehlich 1、Mehlich 3、水、IIP、AER
  やや酸性〜ややアルカリ性（slightly acid to slightly alkaline）	6.0〜7.2	Al-P、Fe-P、Mn-P、Mg-P、Ca-P	Bray 1、Mehlich 1、Mehlich 3、Olsen、水、IIP、AER
  アルカリ性（alkaline）、石灰質（calcareous）	＞7.2	Ca-P、Mg-P	Olsen、水、IIP、AER
  Bray 1：塩酸（HCｌ）とフッ化アンモニウム（NH4F）←Bray and Kurtz（1945） Mehlich 1：塩酸（HCｌ）と硫酸（H2SO4）←Mehlich Mehlich 3：酸〔酢酸（HOAc）と硝酸（HNO3）〕と塩〔フッ化アンモニウム（NH4F）と硝酸アンモニウム（NH4NO3）〕とキレート剤〔エチレンジアミン四酢酸（EDTA、C10H16N2O8、(HOOCCH2)2NCH2CH2N(CH2COOH)2）〕←Mehlich（1984） Olsen：炭酸水素ナトリウム（NaHCO3）（pH=8.5）←Olsen et al.（1954） IIP：鉄酸化物含浸紙（Fe-oxide impregnated paper）←Chardon（2000） AER：陰イオン交換樹脂（anion exchange resin）←Sharpley（2000）

【リン連続抽出法各論】

【2010】

• Kuster-Heins（uの頭に¨） et al.(2010)による『Benthic phosphorus and iron budgets for three NW African slope sediments: a balance approach』から【見る→】
  

  表1．連続抽出ステップ（Ruttenberg, 1992；Schenau and De Lang, 2000；Latimer et al., 2006による）．各ステップ後に、抽出／洗浄液は遠心分離されて濾過（0.2μm）された．

  ステップ	試薬	抽出されたリン成分
  （１）生物起源（biogenic）	25 ml 2M NH4Cl（塩化アンモニウム） (pH 7)	交換可能なP（exchangeable P）、生物起源アパタイト（biogenic apatite）、アパタイト先駆鉱物（apatite precursor mineral）、CaCO3結合P（CaCO3-bound P）
  （２）Fe3+結合（Fe(III)-bound）	25 ml クエン酸（citrate）亜ジチオン酸（dithionite）バッファー（buffer）（pH 7.5）、 25 ml 2M NH4Cl, 25 ml dem. water（脱鉱物質水）	吸着された還元可能な／反応性のFe3+結合P（adsorbed and reducible/reactive Fe(III)-bound P）
  （３）自生（authigenic）	25 ml 1M 酢酸ナトリウム（Na-acetate）（pH 4）、 25 ml 2M NH4Cl, 25 ml dem. water	自生アパタイト（authigenic apatite）
  （４）砕屑性（detrital）	25 ml 1M HCl、 25 ml dem. water	砕屑性P（detrital P）
  （５）有機結合（organic-bound）	550℃での強熱（ignition）後に 25 ml 1M HCl	有機P（organic P）
  （６）オパール結合（opal-bound）	85℃で25 ml 1.5M NaOH	オパールに伴うP（opal-associated P）

• Wilson et al.(2010)による『A record of phosphorus dynamics in oligotrophic lake sediment』から【見る→】
  

  連続抽出		抽出物など
  湿った堆積物 1 g以上
  1	1M NH4Cl、pH 7、 25℃、1時間	ゆるく吸着した、 交換可能な、 孔隙水画分
  2	0.1M NaHCO3でバッファーした、 0.1M Na2S2O4（bicarbonate-dithionite、BD）、 40℃、30分	還元剤で可溶な画分〔主に、鉄とマンガンの（オキシ）水酸化物に伴うP〕
  3	0.1M NaOH、 25℃、16時間	いくらかのアルミニウムと鉄（オキシ）水酸化物に伴うP、 いくらかの有機と生物起源P
  4	0.5M HCｌ、 25℃、16時間	酸溶解鉱物
  5	1M NaOH、 85℃、24時間	残り
  AlとFeとPに対するPsenner et al. (1988)による連続抽出法の一部を変えたもの。最初のステップで、蒸留水の代わりにNH4Clを使用（Tessier et al. 1979）、第三ステップで1M NaOHの代わりに0.1M NaOHを使用（Hieltjes and Lijklema 1980）。

• Zhang et al.(2010)による『Abundance and chemical speciation of phosphorus in sediments of the Mackenzie River Delta, the Chukchi Sea and the Bering Sea: Importance of detrital apatite』から【見る→】
  

  図2　堆積性リンの異なる形態の連続抽出に用いた方法．抽出には全てのステップにおいて50ミリリットルを用いた．抽出物は溶存無機リン（DIP）と全溶存リン（TDP）について決定し、溶存有機リンはそれらの差として計算した．
  〔※Ruttenberg(1992)によるSEDEX法を基本にしたものである。〕

  	0.5 gの乾燥堆積物
  ステップ1	pH 8 1M MgCl2 2時間、25℃	DIP、TDP →	吸着された無機P （Adsorbed inorganic P） 交換可能な有機P （Exchangeable organic P）
  ステップ2	BD（bicarbonate dithionite mixed solution、NaHCO3＋Na2S2O4） 4時間、25℃	DIP →	鉄結合無機P （Fe-bound inorganic P）
  	0.5M NaCl すすぎ洗い、2時間、25℃
  ステップ3	pH 4酢酸バッファー 6時間25℃	DIP、TDP →	自生アパタイト （Authigenic apatite） CaCO3結合無機および有機P （CaCO3-bound inorganic and organic P）
  	1M MgCl2 すすぎ洗い、2時間25℃
  ステップ4	1M HCｌ 16時間、25℃	DIP →	砕屑性アパタイト （Detrital apatite）
  ステップ5	550℃で灰化 1M HCｌ 16時間、25℃	DIP →	溶けにくい有機P （Refractory organic P）

【2009】

• Hupfer et al.(2009)による『Evaluation of a well-esablished sequential phosphorus fractionation technique for use in calcite-rich lake sediments: identification and prevention of artifacts due to apatite formation』から【見る→】
  

  表1．Psenner et al（1984）に従って修正された連続リン抽出法および画分中に期待されるリン（他の研究者らによる修正を含む）

  抽出剤／画分	時間 （時間）	分析されたリン	期待されるリン化学種
  1M NH4Cl（脱酸素化された）	0.5	TP	孔隙水中のP、表面にゆるく吸着したP（例えば、FeOOHやCaCO3の表面）
  0.11M BD（bicarbonate/dithionite）	1	TP	酸化されたFeとMn化合物に主に結合した酸化還元に敏感なP
  1M NaOH	16	SRP	OH-イオンに対して交換可能なP〔例えば、AlとFe（オキシ）水酸化物に吸着したP〕および塩基中で可溶な無機P化合物〔FeとAl（水酸化）リン酸塩〕
  		NRP	ポリリン酸（poly-P）と砕屑物中の有機Pとフミン化合物に結合したPを含む微生物中のP
  0.5M HCｌ	16	TP	Caリン酸塩鉱物および酸に可溶の有機P
  残渣P（Residual-P、Res-P）		TP	溶けにくい（refractory）有機Pおよび抽出できない（nonextractable）鉱物P
  NRP＝非反応性リン（nonreactive phosphorus）、SRP＝可溶の反応性リン（soluble reactive phosphorus）、TP＝全リン（total phosphorus）

• 小松ほか（2009）による『富栄養化した霞ヶ浦の堆積物に養殖の痕跡を残すリンの形態と分布』から【見る→】
  

  図2．本研究で用いた分析および形態別リンの連続抽出の概要．（元は図）

  〔リンの形態別分画定量法はWilliams et al.（1971）に準じたもの。CDFB＝citrate（クエン酸塩）-dithionite（亜ジチオン酸塩）-bicarbonate（炭酸水素塩、重炭酸塩）；RP=reactive phosphorus；NRP=non-reactive phosphorus。無機態リンの分析は、CDB抽出液についてはWatanabe and Olsen（1962）によるモリブデン青−塩化スズ（II）還元吸光光度法、NaOHおよびHCｌ抽出液についてはMurphy and Riley（1962）によるモリブデン青−アスコルビン酸還元吸光光度法により測定された。全リンは、Menzel and Corwin（1965）によるペルオキソニ硫酸カリウム分解法の後、モリブデン青−アスコルビン酸還元吸光光度法により測定された。各抽出液中P＝RP＋NRP、RP＝IP（無機P）、NRP＝TP（全P）−IP＝有機P。〕

  試料	処理	抽出リン画分
  堆積物コア試料	薄切り、 計量	−
  薄切り（sliced）堆積物試料	計量、 遠心分離〔3000回転／分（1430 G）、20分間〕	−
  上記試料	酸揮発性硫化物態硫黄量（acid volatile sulfide）測定、 湿重量計量、 乾燥（105℃、2時間）、 乾重量計量（含水率）	−
  乾燥試料	炭酸塩の除去（振とう、25℃、24時間）、 全有機炭素（TOC）と全窒素（TN）を測定	−
  	粒度分布測定、 強熱（550℃、2時間）、 強熱減量（ignition loss）測定	−
  リンの分別	0.22M Na3C6H5O7・H2O（クエン酸ナトリウム） 0.11M NaHCO3（炭酸水素ナトリウム） Na2S2O4（亜ジチオン酸ナトリウム） 85℃で30分間抽出	CDB-RP（Fe-P；非アパタイト） CDB-NRP（有機P）
  残渣	1M NaOH（水酸化ナトリウム） 振とう、25℃で16時間抽出	NaOH-RP（Al-P；非アパタイト） NaOH-NRP（有機P）
  残渣	2M HCｌ（塩酸） 100℃で30分間抽出⇒加熱抽出法（井澤・清木、1982）	HCl-RP（Ca-P；アパタイト） HCｌ-NRP（有機P）

• Kuster-Heins（uの頭に¨）(2009)による『Geochemical conditions in continental margin surface sediments: implications for distribution and cycling of phosphorus』から【見る→】
  

  表2　連続抽出法（Sequential extraction scheme）（Ruttenberg,1992; Schenau and De Lange,2000）

  ステップ		試薬	抽出されたリン成分
  1	生物起源 （Biogenic）	25 ml 2M NH4Cl（塩化アンモニウム） (pH 7)	残留孔隙水中のP、交換可能なP、生物起源アパタイト、アパタイト先駆鉱物、炭酸塩に伴うP
  1b	交換可能 （Exchangeable）	25 ml 0.35M NaCl	交換可能で、ゆるく吸着したP
  2	酸化物結合 （Oxide-associated）	25 ml クエン酸（citrate）亜ジチオン酸（dithionite）バッファー（pH 7.5）、 25 ml 2M NH4Cl, 25 ml dem. water（脱鉱物質水）	吸着した還元性／反応性のFe3+結合P
  3	自生 （Authigenic）	25 ml 1M 酢酸ナトリウム（Na-acetate）（pH 4）、 25 ml 2M NH4Cl, 25 ml dem. water	自生P
  4	砕屑性 （Detrital）	25 ml 1M HCl、 25 ml dem. water	砕屑性P
  5	有機 （Organic）	550℃での強熱（ignition）後に 25 ml 1M HCl	有機P

• Pierzynski et al.(2009)による『Methods of phosphorus analysis for soils, sediments, residuals, and waters: Introduction』から〔Methods of Phosphorus Analysis for Soils, Sediments, Residuals, and Waters Second Edition【見る→】の中のページ〕
  

  表１　流出水と排出水のリンの形態についての用語の標準化案

  リンの形態	略称	分析法の例*
  全リン 　溶存相および粒子状相の全量	TP	濾過してない水試料の温浸（digestion） →Kjeldahl法、または →ペルオキソ二硫酸アンモニウム〔ammonium persulfate、過硫酸アンモニウム、（NH4)2S2O8〕酸
  全溶存リン 　溶存無機リン（オルトP）および溶存有機リン	TDP	濾過試料の過硫酸温浸（persulfate digestion）
  正リン酸塩（オルトリン酸塩、orthophosphate）	Ortho P	イオンクロマトグラフィー
  溶存反応性正リン酸塩 　藻類が直接利用できるリン、およびおよそ0.45μm以下で容易に変化する有機質およびコロイド質リンも含まれる可能性あり	DRP	Murphy & Riley 濾過試料の比色（colorimetric）分析またはICP分析
  生物が利用可能なリン酸塩 　溶存オルトP、および藻類が利用可能な粒子状リンの一部	BAP	濾過してない試料の以下の抽出： →NaOH →Cl-飽和陰イオン交換樹脂 →フッ化アンモニウム（ammonium fluoride） →鉄酸化物フィルター紙片（Iron-oxide filter paper strips）
  モリブデン酸反応性リン 　溶存オルトP、および酸抽出可能な粒子状リン（たぶん藻類が利用可能）	MRP	Murphy & Riley 濾過してない試料の比色分析
  粒子状リン 　浸食された堆積物に伴うか結合した無機と有機のリン	PP	全リンと全溶存リンの差（TP−TDP）
  溶存有機リン** 　ポリリン酸塩（polyphosphate）および加水分解可能なリン酸塩を含む	DOP	全溶存リンと溶存反応性正リン酸塩の差（TDP−DRP）
  *　適切に用いることができるすべての方法を示している訳ではない。濾過試料は0.45μm孔径のフィルターを通過したものとして定義される。 **　溶存有機リンが全溶存リンの25％以上であれば、ポリリン酸塩および加水分解可能なリン酸塩を測定する必要があるだろう。

• Zhang and Kovar(2009)による『Fractionation of soil phosphorus』から〔Methods of Phosphorus Analysis for Soils, Sediments, Residuals, and Waters Second Edition【見る→】の中のページ〕
  

  図1　無機リンについての連続分画法（元は図）

  非石灰質土壌				石灰質土壌
  100 mLの遠心分離管に土壌試料1.0 g				100 mLの遠心分離管に土壌試料1.0 g
  ↓				↓
  50 mLの1M NH4Clを加え、30分間振とう（shake）、遠心分離	A →	可溶性でゆるく結合したP （Soluble and loosely bound P）	A ←	50 mLの0.1M NaOH＋1M NaClを加え、17時間攪拌、遠心分離、飽和NaClで洗浄
  残渣 ↓
  50 mLの0.5M NH4Fを加え、1時間振とう、遠心分離、飽和NaClで洗浄	B →	Al-P	A ←
  残渣 ↓
  50 mLの0.1M NaOHを加え、17時間振とう、遠心分離、洗浄	C →	Fe-P	A ←
  残渣 ↓				残渣 ↓
  40 mLの0.3M Na3C6H5O7・2H2O（クエン酸ナトリウム）と5 mLの1M NaHCO3（炭酸水素ナトリウム）と1.0 gのNa2S2O4（亜ジチオン酸）を加え、.加熱、攪拌（stir）、加熱、遠心分離、洗浄	D →	還元剤で可溶なP （Reductant soluble P）	B ←	40 mLの0.3M Na3C6H5O7・2H2O（クエン酸ナトリウム）と5 mLの1M NaHCO3（炭酸水素ナトリウム）と1.0 gのNa2S2O4（亜ジチオン酸）を加え、.加熱、攪拌、加熱、遠心分離、洗浄
  残渣 ↓				残渣 ↓
  50 mLの0.25M H2SO4を加え、1時間振とう、遠心分離、洗浄	E →	Ca-P	C ←	50 mLの0.5M HClを加え、1時間振とう、遠心分離、洗浄

  
  

  図2　有機リンについての連続分画法（元は図）

  100 mLの遠心分離管に湿った土壌試料1.0 ｇ（オーブンで乾燥） （oven-dry basis）				100 mLの遠心分離管に湿った土壌試料1.0 ｇ（オーブンで乾燥）
  ↓				↓
  				2 mLのCHCl3（クロロホルム）（微生物細胞の分解） （lyses microbial cells）
  50 mLの0.5M NaHCO3（炭酸水素ナトリウム）を加え、16時間振とう、遠心分離、濾過	分液 （Aliqout） →	不安定なPi （Labile Pi）		↓
  	分液 →	過硫酸温浸 （Persulfate digestion）	←	50 mLの0.5M NaHCO3（炭酸水素ナトリウム）を加え、16時間振とう、遠心分離、濾過
  残渣 ↓		↓
  		不安定なPの総量 （Total Labile P） 不安定なPo＝不安定なPの総量−不安定なPi バイオマスPo＝全PCHCl3−不安定なPの総量
  50 mLの1.0M HCｌ（塩酸）を加え、3時間振とう、遠心分離、濾過	分液 →	適度に不安定なPi （Moderately Labile Pi）
  	分液 →	過硫酸温浸	→	全P 適度に不安定な（Moderately Labile）Po＝全P−Pi
  残渣 ↓
  脱イオン水で5分間すすぎ洗い、遠心分離	→	上澄み液廃棄 （Discard Supernatant）
  残渣 ↓
  50 mLの0.5M NaOH（水酸化ナトリウム）を加え、6時間振とう、遠心分離、濾過	分液 →	過硫酸温浸	→	全P
  	分液 →	pH 1.0-1.5に酸性化、遠心分離	分液 →	過硫酸温浸
  				↓
  				フルボ酸Po （Fulvic Acid Po） フミン酸（Humic Acid）Po＝全P−フルボ酸Po
  脱イオン（deionized）水で5分間すすぎ洗い（rinse）、遠心分離	→	上澄み液廃棄
  残渣 ↓
  550℃で灰化（ash）1時間	→	50 mLの1.0M H2SO4（硫酸）を加えて溶解、振とう24時間	→	不安定でないPo （Nonlabile Po）

【2008】

• 対馬ほか（2008）による『猪鼻湖堆積物の形態別リンの分布特性』から
  

  表-1連続曲出による抽出溶液と分画されるリンの形態 　各抽出溶液に含まれる特定の形態のリンを順に定量する方法である。図-2及び表-1に示したようにリンの抽出に用いられる溶液は抽出の順 に、1M塩化アンモニウム溶液、0.11M BD溶液(炭酸水素ナトリウム・亜ジチオン酸ナトリウム混合溶液)、1M水酸化ナ トリウム溶液、0.5M塩酸溶液である。それぞれの溶液による抽出操作の後には洗浄と抽出の完了のため純水と塩化アンモニウム溶液を用いて抽出操作を行い、異なる溶液の混合を避けた。	図-3各試料の形態別リン量の割合
  表-3　湖底堆積物と河川懸濁物の形態別リン量(mgP/g-dry)
  図-4調査地点の水深とリン量の比較(沿岸部で高い項目)	図-5調査地点の水深とリン量の比較(沿岸部で低い項目)
  対馬ほか（2008）による『猪鼻湖堆積物の形態別リンの分布特性』から

• Oxmann et al.（2008）による『Quantification of individual phosphorus species in sediment: a sequential conversion and extraction method』か

  Figure 2 CONVEX scheme for the quantification of phosphorus species in sediment. 1A & 1B, conversion procedure; 2A-3C, extraction procedure. A conversion time of 7 days is recommended for species determination.（図2　堆積物中のリン化学種の定量化のためのCONVEX法．1Aと1Bは変換法．2A〜3Cは抽出法．化学種の決定には7日間の変換時間を推奨する．） Oxmann et al.（2008）による『Quantification of individual phosphorus species in sediment: a sequential conversion and extraction method』か

• Kapanen(2008)による『Phosphorus fractionation in lake sediments』から【見る→】
  

  図1．リン分別法：副試料についての全P（P-tot）とアパタイトP（HCｌ−P）とゆるく結合したP（NH4Cl-P）と金属酸化物結合P（NaOH-P）の4種類の浸出法（Hieltjes and Lijklema,1980を修正）．（元は図）

  試料 （４種類）	方法	画分
  0.1 g	加熱（burning）550℃で3時間、 残渣：5 mLの0.5M HCｌ（塩酸）を加え、室温で48時間、 抽出⇒	P-tot （全P）
  0.1 g	5 mLの0.5M HCｌ（塩酸）を加え、室温で24時間、 抽出⇒	HCl-P （アパタイトP）
  1 g	10 mLの1M NH4Cｌ（塩化アンモニウム）を加え、室温で2時間振とう、 抽出⇒ 残渣：10 mLの1M NH4Cｌ（塩化アンモニウム）を加え、室温で2時間振とう、 抽出⇒	NH4Cｌ-P （ゆるく結合したP）
  1 g	10 mLの0.1M NaOH（水酸化ナトリウム）を加え、室温で17時間振とう、必要ならH2SO4（硫酸）でフミン酸（humic acid）を抽出、 抽出⇒	NaOH-P （金属酸化物結合P）

【2006】

• Latimer et al.(2006)による『Opal-associated particulate phosphorus: Implications for the marine P cycle』から【見る→】
  

  表2　抽出ステップ（Mortlock and Froelich, 1989とRuttenberg, 1992とAnderson and Delaney, 2000から）

  ステップ	試薬	分離されたリン成分
  酸化物に伴った	10mL CDB溶液（6時間）（0.22Mクエン酸ナトリウム、1M炭酸水素ナトリウム、0.13M亜ジチオン酸ナトリウム）、 10mL 1M塩化マグネシウム（2時間）、 10mL水（2時間）	吸着したおよび還元可能なあるいは反応しやすい鉄結合P（Adsorbed and reducible or reactive Fe-bound P）
  自生	酢酸でpH 4に緩衝した10mL 1M酢酸ナトリウム、 10mL １M塩化マグネシウム（2時間）−2回、 10mL水（2時間）	炭酸フッ素燐灰石（Carbonate fluorapatite、CFA）、 生物起源水酸化燐灰石（biogenic hydroxy apatite）、 CaCO3結合P
  砕屑性	10mL １M塩酸（16時間）	砕屑性P（Detrital P）
  有機	1mL 50％（w/v）硝酸マグネシウム、 オーブンで低温乾燥、 550℃で灰化（2時間）、 10mL １M塩酸	有機P（Organic P）
  オパールに伴った	10mL 1.5M水酸化ナトリウム（85℃、2時間）、 または、 10mL 1.5M水酸化ナトリウム（85℃、2時間）の後に10mL 2M炭酸ナトリウム（85℃、5時間）	オパールに伴ったP（Opal-associated P）
  残渣（Residual）	5mL硝酸、4mLフッ化水素酸、1mL塩酸	続く抽出ステップで残留するP（P remaining following extraction steps）

【2005】

• Fytianos & Kotzakioti(2005)による『Sequential fractionation of phosphorus in lake sediments of northern Greece』から【見る→】
  

  図１．　本研究で用いた連続抽出法．（元は図）
  Psenner et al.(1984)による連続抽出法を主とし、Hupfter et al.(1995)による方法を一部加えたもの

  連続抽出の流れ	抽出剤など	分画リン
  堆積物試料（各画分の残渣が次へ）
  画分１：中性でのNH4Cl抽出リン	25 mlの1M NH4Cl、 pH 7で2時間	NH4Cｌ−P	ゆるく吸着したP
  画分２：バッファーした亜ジチオン酸（dithionite）抽出リン（25℃）	0.11M Na2S2O4/NaHCO3、 1時間	BD-P	Fe-P
  画分３：NaOH抽出リン	0.1M NaOH、 16時間	NaOH−ｒP	“Al-P”
  画分４：HCｌ抽出リン	0.5M HCｌ、 16時間	HCｌ−P	Ca-P
  画分５：残渣リン		Residual-P	（計算された）“Res-P”

【2004】

• 井上ほか（2004）による『河川水中懸濁物質と流域土壌の連続抽出法による分画とその特性』
  

  表-1 リンの連続抽出法	図-3 河川懸濁物質、土壌、藻類中のリンの組成比
  表-2 自然界に存在する件濁態リンの形態
  図-2 SS濃度とSS当りのリンの量
  井上ほか（2004）による『河川水中懸濁物質と流域土壌の連続抽出法による分画とその特性』

【2003】

• Ruttenberg(2003)による『8.13 The global phosphate cycle』【見る→】
  

  図８　海洋堆積物中の異なる形態のリンを定量するためのSEDEX連続抽出法を構成する一連の抽出剤と抽出条件（Ruttenberg,1992から）

【2002】

• Motavalli & Miles(2002)による『Soil phosphorus fractions after 111 years of animal manure and fertilizer applications』から【見る→】
  

  図1　連続リン抽出法および抽出した土壌リン画分の実用的な重要性（Pi＝無機リン、Po＝有機リン）（Okalebo et al.1993から）（元は図）

  〔土壌リンの連続抽出法は、Hedley et al.（1982）をBeck and Sanchez（1994）が修正したもの〕

  方法	リン画分	実用的なリンプール
  土壌試料（1.5 g）
  0.4 gの陰イオン交換樹脂、 16時間振とう、 20 mLの0.5M HCｌで回収されたリン	樹脂による無機リン（Resin Pi）	利用可能の（Available）
  30 mLの0.05M NaHCO3（炭酸水素塩）（pH 8.5）、 16時間振とう	炭酸水素塩による無機リンと有機リン（Bicarbonate Pi + Po）	不安定な（Labile）
  30 mLの0.1M NaOH（水酸化ナトリウム）、 16時間振とう	水酸化ナトリウムによる無機リンと有機リン（NaOH Pi + Po）	ゆっくりした（Slow）
  20 mLの0.1M NaOH（超音波処理）、 16時間振とう	水酸化ナトリウムの超音波処理による無機リンと有機リン（NaOH sonication Pi + Po）	吸蔵された（Occluded）
  30 mLの1.0M HCｌ（塩酸）、 16時間振とう	塩酸による無機リン（HCl Pi）	風化可能なl鉱物（Weatherable mineral）
  5.0 mLのH2SO4（濃硫酸）による温浸（digestion）、 360℃で3時間	残渣リン（Residual P）	不活性の（Passive）

【2000】

• Rydin(2000)による『Potentially mobile phosphorus in Lake Erken sediment』から【見る→】
  

  図1．Psenner et al.（1988）に基本的に倣った、本研究で用いたリン分別法．（元は図）

  堆積物試料	1M NH4Cｌ、pH 7で2.2時間		NH4Cｌ−P『ゆるく吸着したP』（Loosely sorbed-P）
  残渣	0.11M Na2S2O4/NaHCO3、1時間		BD-P『Fe-P』
  残渣	0.1M NaOH、16時間		NaOH−ｒP『Al-P』
  		温浸（digestion）	NaOH−Tot P
  残渣	0.5M HCｌ、16時間		HCｌ−P『Ca-P』
  			残渣P（residual-P）（計算による）『Res-P』

• Anderson & Delaney(2000)による『Sequential extraction and analysis of phosphorus in marine sediments: Streamlining of the SEDEX procedure』から【見る→】
  

  表2．　SEDEX5ステップ法と4ステップ抽出法の概略と比較

  SEDEX5ステップ法 （Ruttenberg, 1992）		4ステップ法 （本研究）
  ステップ名（ステップ番号）と化学過程	化学処理	新ステップ名（新ステップ番号）	化学処理の変更	コメント
  吸着した（１） 塩化物による質量作用競合	1M MgCl2（pH=8）、10 ml、2時間 1M MgCl2（pH=8）、10 ml、2時間 蒸留水、10 ml、2時間		最初のイオン交換ステップを除外した	『酸化物に伴った』とともに抽出された『吸着した』
  酸化物に伴った（２） 亜ジチオン酸塩による還元とクエン酸塩での錯体化	0.22Mクエン酸ナトリウム＋0.14M亜ジチオン酸ナトリウム＋1.0M炭酸水素ナトリウム（pH=7.6）、10 ml、6時間	酸化物に伴った、または 『吸着した＋酸化物に伴った』（１）	亜ジチオン酸ナトリウムの濃度を0.033Mに減らした	もし全試料が鉄酸化物であれば、見積られる最大濃度はすべての鉄酸化物を還元する必要である 亜ジチオン酸塩の濃度を小さくすると、分析のバックグランド値を減らせる
  自生（３） 溶解	1M酢酸ナトリウムでバッファー（緩衝）（pH=4）、10 ml、2時間 1M MgCl2（pH=8）、10 ml、2時間 1M MgCl2（pH=8）、10 ml、2時間 蒸留水、10 ml、2時間	自生（２）	二番目のイオン交換ステップの時間を減らし、各1時間の蒸留水によるすすぎ洗いとした	時間の短縮により、ステップ２を完了して同日にステップ３を開始でき、必要な分析作業の日数を減らせる
  砕屑性（４） 酸溶解	1N HCl、13 ml、16時間	砕屑性（３）
  有機（５） 酸溶解	50％（w/v）MgNO3、1 ml、80℃でオーブン乾燥、550℃で灰化 1N HCl、13 ml、24時間	有機（４）

• Schenau & De Lange(2000)による『A novel chemical method to quantify fish debris in marine sediments』から【見る→】
  

  表2.　連続抽出法と抽出リン画分と複数の測定に対する相対誤差

  ステップ	抽出剤	抽出されるリン相	相対誤差 （％）	文献
  1	●8×25 ml 2M NH4Cl （塩化アンモニウム）（アンモニアでpH 7に調整）、4時間、20℃	●交換性またはゆるく吸着したP （Exchangeable or loosely sorbed P） ●炭酸塩に伴ったP （Carbonate associated P） ●生物起源アパタイト （Biogenic apatite）	＜4	本研究
  2	●1×25 ml 0.15M Na-citrate（クエン酸ナトリウム）と0.5M NaHCO3（炭酸水素ナトリウム）と1.125 g Na-dithionite（亜ジチオン酸ナトリウム）、16時間、20℃ ●1×25 ml 2M NH4Cl（pH 7）、2時間 ●1×25 ml demin.water（脱鉱物質水）、2時間	●易還元性または反応性鉄-結合P （Easily reducible or reactive iron-bound P）	＜10	Ruttenberg（1992）に倣う
  3	●1×25 ml 1M Na-acetate（酢酸ナトリウム）〔acetic acid（酢酸）でpH 4に緩衝した〕、16時間、20℃ ●1×25 ml 2M NH4Cl（pH 7）、2時間 ●1×25 ml demin.water、2時間	●自生アパタイト （Authigenic apatite）	＜10	Ruttenberg（1992）に倣う
  4	●25 ml 1M HCｌ（塩酸）、16時間、20℃ ●1×25 ml demin.water、2時間	●砕屑性アパタイト （Detrital apatite）	＜7	Ruttenberg（1992）
  5	●5 ml 6.5 : 2.5 : 1混合物〔HCｌO4（過塩素酸）（60％）＋HNO3（硝酸）（65％）＋H2O〕と5 ml HF（フッ化水素）（40％）、16時間、90℃〔total digestion）全温浸〕	●有機P （Organic P） ●粘土鉱物に吸着したP （P adsorbed to clay minerals）	＜10	Lord（1982）

【1995】

• Paludan & Jensen（1995）による『Sequential extraction of phosphorus in freshwater wetland and lake sediment: Significance of humic acids』から
  

  Figure 1. Fractionation scheme used in extraction of P pools from freshwater wetland and humic lake sediments. DRP and DNRP are dissolved reactive P and dissolved non reactive R（図1　淡水湿地と腐植質の湖堆積物からのリン・プールの抽出に用いた分別法．DRPとDNRPは溶存反応性リンと溶存非反応性リンをそれぞれ示す．） Paludan & Jensen（1995）による『Sequential extraction of phosphorus in freshwater wetland and lake sediment: Significance of humic acids』から

• Hupfer et al.（1995）による『Transformation of phosphorus species in settling seston and during early sediment diagenesis』から【見る→】
  

  表2．Psenner et al.（1984）を修正したリン連続抽出法および各画分に期待されるリン化学種（いくつかの論文から） 抽出剤 時間 期待されるリンの形態 １．　NH4Cl（1M） 0.5時間 SRP／NRP 間隙水中の表面（例えば、鉄やCaCO3の表面）にゆるく吸着したリン、すぐ利用できるリン ２．　BD（0.11M） 炭酸水素塩／亜ジチオン酸塩（bicarbonate/dithionite） １時間 SRP 鉄水酸化物とマンガン化合物に主に結合した酸化還元に敏感なリン NRP 有機リン ３．　NaOH（1M） 16時間 SRP 水酸基イオンと交換可能な、主にアルミニウムや鉄の酸化物に結合したリン NRP ポリリンとデトリタス（detritus）中の有機リンとフミン化合物（humic compounds）に結合したリンを含む微生物中のリン ４．　HCl（0.5M） 16時間 SRP 炭酸塩に結合したリンと燐灰石リン、微量の水和した有機リン NRP 有機リン ５．　残渣リン 　 TP 有機および他の安定な（refractoy）リン NRP：非反応性リン（non reactive P） SRP：可溶の反応性リン（soluble reactive P） TP：全リン（total P）〕 Hupfer et al.（1995）による『Transformation of phosphorus species in settling seston and during early sediment diagenesis』から

• Cross & Schlesinger(1995)による『A literature review and evaluation of the Hedley fractionation: Applications to the biogeochemical cycle of soil phosphorus in natural ecosystems』【見る→】
  

  図1　土壌に対するHedley連続リン分画法（Tiessen et al.,1984から）（元は図）

  50 mLの遠心分離管に0.5ｇの土壌試料	30 mLの脱イオン水と0.4 gのDowex（ダウエックス、イオン交換樹脂）1×8-50の炭酸水素塩（重炭酸塩）態の陰イオン交換樹脂を加え、16時間振とう、樹脂バッグ除去、遠心分離、上澄み液廃棄	樹脂P（Pi）
  土壌	30 mLのNaHCO3（炭酸水素ナトリウム）（pH 8.5）を加え、16時間振とう、遠心分離、上澄み液採取	Bicarbonate P（炭酸水素塩P）（PiとPo）
  土壌	30 mLの0.1M NaOH（水酸化ナトリウム、苛性ソーダ）を加え、16時間振とう、遠心分離、上澄み液採取	Hydroxide P（水酸化物P）（PiとPo）
  	20 mLの0.1M NaOHを加え、2分間氷浴中で75W（Braunsonic 1510）で超音波処理、30 mLに容積調整、16時間振とう、遠心分離、上澄み液採取	Sonicate/hydroxide P（超音波処理／水酸化物P）（PiとPo）
  土壌	30 mLの1.0M HCｌ（塩酸）を加え、16時間振とう、遠心分離、上澄み液採取	Acid P（酸P）（Pi）
  残渣土壌	5 mLのH2SO4（硫酸）とH2O2（過酸化水素）で温浸（Digest）	Residue P（残渣P）（全Pのみ）

【1993】

• 鈴村・鎌谷（1993）による『酸−アルカリ連続抽出法による海底堆積物中の有機態リン化合物の分画』【見る→】
  

  図1　堆積物試料からのリンの穏やかな抽出法の概略図．（元は図）

  〔鎌谷・前田（1989）による酸−アルカリ連続抽出法に準じたもの。全リンはMg(NO3)2灰化法による（定量はMurphy and Riley (1962）によるアスコルビン酸還元−モリブデン青法）。各分画について、測定した全リンと無機態リンの差を有機態リンとみなす。〕

  試料	処理	抽出リン画分
  凍結乾燥試料（〜0.25 g）	25 mlの1N HCl（塩酸）を加え、 室温で15分間振とう、 遠心分離
  残渣	15 mlの0.1M NaClを加え、 遠心分離
  上澄み液（酸抽出）		酸分画
  残渣	25 mlの0.05N NaOH（水酸化ナトリウム）を加え、 室温で18時間振とう、 5 mlの飽和NaClを加え、 遠心分離
  残渣	15 mlの0.1M NaClを加え、 遠心分離
  上澄み液（冷アルカリ抽出）		冷アルカリ分画
  残渣	25 mlの0.05N NaOHを加え、 90℃で4時間静置、 5 mlの飽和NaClを加え、 遠心分離
  残渣	15 mlの0.1M NaClを加え、 遠心分離
  上澄み液（熱アルカリ抽出）		熱アルカリ分画

• Jensen & Thamdrup(1993)による『Iron-bound phosphorus in marine sediments as measured by bicarbonate-dithionite extraction』から【見る→】
  

  図1．海洋堆積物中のリン・プールに対する連続抽出法の図示．略号；TP（全リン、total P）、SRP（可溶の反応性リン、soluble reactive P）、NRP（非反応性リン、non-reactive P）、BD（炭酸水素塩−亜ジチオン酸、bicarbonate-dithionite）．（元は図）

  〔淡水堆積物の抽出法はPsenner et al.（1988）による。〕

  ステップ	処理		リン画分	その他
  1gの湿った堆積物試料
  １	250 mlの0.46M NaCl、1時間、 上澄み液⇒	1.00 mlの1M H2SO4（硫酸）、 51 mlのNaCl画分⇒	TPNaCl、SRPNaCl	NRPNaCl＝TPNaCl−SRPNaCl
  	25.0 mlの0.46M NaCl、 上澄み液⇒
  ２	25 mlのBD、1時間、 上澄み液⇒	8.00 mlの1M H2SO4（硫酸）、 106 mlのBD画分⇒	曝気1時間、 FeBD、MnBD、 SRPBD⇒	発色錯体の抽出 ヘキサノール／イソプロパノール（hexanol/isopropanol）
  	25 mlのBD、 上澄み液⇒
  	25 mlのBD、 上澄み液⇒
  	25.0 mlの0.46M NaCl、 上澄み液⇒
  ３	25.0 mlの0.1M NaOH（水酸化ナトリウム）、18時間、 上澄み液⇒	8.00 mlの1M H2SO4（硫酸）、 78 mlのNaOH画分	TPNaOH、SRPNaOH	NRPNaOH＝TPNaOH−SRPNaOH
  	25.0 mlの0.1M NaOH、 上澄み液⇒
  	25.0 mlの0.46M NaCl、 上澄み液⇒
  ４	25.0 mlの0.5M HCｌ（塩酸）、1時間、 上澄み液⇒	50 mlのHCｌ画分	SRPHCl
  	25.0 mlの0.46M NaCl、 上澄み液⇒
  ５	堆積物残渣を105℃で乾燥、 520℃で強熱（ignition）
  	25.0 mlの1M HCｌ（塩酸）、10分間沸騰、 上澄み液⇒	100.0 mlの蒸留水、 100.0 mlの残渣（residual）画分	SRPRes

【1992】

• Ruttenberg(1992)による『Development of a sequential extraction method for different forms of phosphorus in marine sediments』から【見る→】
  

  表１．　SEDEX法．反応メカニズム．

  ステップ	抽出剤	抽出相	反応*
  �T	１モルMgCl2（塩化マグネシウム） （pH 8）	交換性またはゆるく吸着したP （loosely sorbed P）	MgPO4-錯体の生成および（または）Cl-による質量作用置換
  �U	0.30モルNa3-citrate〔クエン酸三ナトリウム、 Na3(C3H5O(COO)3)〕 1.0モルNaHCO3（炭酸水素ナトリウム） （pH 7.6） citrate bicarbonate solution〔クエン酸塩炭酸水素塩（重炭酸塩）溶液〕45ミリリットル中にNa-dithionite（亜ジチオン酸ナトリウム、Na2S2O4）1.125グラム	易還元性または反応性第二鉄-結合〔鉄結合P〕 （ferric iron-bound P）	亜ジチオン酸によるFe3+の還元およびクエン酸による続いてのキレート化
  �V	acetic acid（酢酸）でpH 4に緩衝した１モルNa-acetate（酢酸ナトリウム、CH3COONa）	CFAP＋生物起源hydroxyapatite（ハイドロキシアパタイト）＋CaCO3-結合〔自生アパタイト＋生物起源アパタイト＋CaCO3-結合P〕 （authigenic carbonate fluorapatite + biogenic apatite + CaCO3-associated P）	適度に低いpHでの酸溶解および（または）酢酸によるCa2+のキレート化
  �W	１モルHCl（塩酸）	FAP〔砕屑アパタイト＋その他の無機P〕 （detrital apatite P）	酸溶解
  �X	550℃で灰化 1モルHCｌ（塩酸）	有機P （organic P）	550℃での乾燥酸化 灰化した残渣の１モル塩酸抽出
  *　続くステップ�Uと�VのMgCl2洗浄に対する反応メカニズムはステップ�Tに対して説明されているとおりである。；続くステップ�T〜�VのH2O洗浄によって、次の主要な抽出剤が加えられる前に残留溶液はすべて置換される。
  （注）　SEDEX＝sequential extraction method／CFAP＝carbonate fluorapatite

• De Lange(1992)による『Distribution of various extracted phosphorus compounds in the interbedded turbiditic/pelagic sediments of the Madeira Abyssal Plain, eastern North Atlantic』から【見る→】
  

  表1　非連続的に様々な試薬によって乾燥した粉末の人工および天然リン化合物から抽出された正（オルト）リン酸塩の％

  抽出剤	１ Ca5(PO4)3OH	2 Ca3(PO4)2	3 Fe-P	4 AlPO4・H2O	5 ノジュール
  1N　NH4Cl（pH 7）	3-6	4-6	5-7	4-6	10
  0.1N　NaOH	＜1	＜1	99	91	4
  0.5N　HCl	100	99	99	100	92
  試料中のリンの全量は、0.2〜4 mgの間で変動した；各抽出における試薬は50 ml．（1）ハイドロキシアパタイト、Ca5(PO4)3OH；Riedel-de Haen A.G.による化学製品（純粋）．（2）リン酸カルシウム、Ca3(PO4)2；Merckによる化学製品（純粋）．（3）鉄ハイドロオキシリン酸塩（Ironhydroxyphosphate）、〔Fe-P〕；Hieltjes and Lijklema,1980を参照．（4）アルミニウム正リン酸塩、AlPO4・H2O；BDHによる化学製品（純粋）．（5）コア82PCS16のb-タービダイトの基盤から生じたリン酸塩ノジュール、1゜20.8'N、24゜16.6’Ｗ；本研究の結果、本文参照．Hieltjes and Lijklema (1980)からの表．

  
  

  表2　本研究で用いた連続抽出法

  抽出剤	抽出されたリンの形態
  2N　NH4Cl（塩化アンモニウム）	ゆるく結合（交換可能＋炭酸塩に伴う）〔Pex〕
  0.1N　NaOH（水酸化ナトリウム）	FeとAlに伴う〔POH〕
  0.5N　HCｌ（塩酸）	Caに伴う、アパタイト〔PHCｌ〕
  K2S2O8/H2SO4（過硫酸カリウム／硫酸）	残り〔PR〕
  K2S2O8/H2SO4（過硫酸カリウム／硫酸）	全〔Ptot〕

【1985】

• Lucotte & d'Anglejan(1985)による『A comparison of several methods for the determination of iron hydroxides and associated orthophosphates in estuarine particulate matter』から【見る→】
  

  図1．リンと鉄の異なる画分の決定のために提案された連続抽出法．（１）原子吸光分析、（２）Harwood et al.（1969）の比色分析、（３）Watanabe and Olsen（1962）の比色分析．（元は図）

  〔CDB＝citrate（クエン酸塩）-dithionite（亜ジチオン酸）-bicarbonate（炭酸水素塩、重炭酸塩）〕

  			0.5 g
  Pex（２）←			交換可能 1M 酢酸アンモニウム（ammonium acetate）、 pH＝8.5	→Feex（１）
  0.25 g←				→0.25 g
  PCDB（３）	オキシ水酸化物 CDB	FeCDB（１）		全　Fetot（１） HF-HNO3-HClO4-HCl
  PAp（２）	アパタイト 1N HCｌ（塩酸）
  Porg（２）	全／有機 550℃／1N HCｌ（塩酸）
  Ptot＝Pex＋PCDB＋PAp＋Porg				Fetot−FeCDB＝Felith